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胚胎冷冻生存要领有哪些?了解下

发布时间:2021-12-12 18:36 本文来源: 武汉市普仁医院

  胚胎冷冻生存是将胚胎生存在—196~C超低温的液氮中做持久生存。可使胚胎移植不受时间所在的限制,从而到达提高胚胎移植效率,持久生存优良基因的目的。今天,我们就来介绍下现有的胚胎冷冻要领。

  现有的胚胎冷冻要领有三种:

  ①通例冷冻法:也叫慢速冷冻法、逐步降温法。将收罗到的胚胎用培养液洗涤后置入有差异冷冻掩护剂(甘油或二甲亚枫(DMSO)等)浓度的三种冷冻液中(冷冻液浓度由低到高,终浓度1.4M),每种冷冻液中平衡5分钟,然后将胚胎和冷冻液装入细管中封口、标志,放入冷冻仪中进行冷冻。冷冻速率先以1~3~C/分下降至-6~-7℃,在此温度诱发结晶,平衡10分钟,然后,以0.3℃/分的速率降温至-35~_38℃,之后投入液氮中生存。胚胎解冻后,需按胚胎进入冷冻液时的相反浓度,即从高到低浓度脱除冷冻掩护剂,每步5分钟,后置入含20%血清的PBS掩护液中洗涤3次,脱除冷冻掩护剂。或者将解冻后的胚胎放入0.5M(或1.0M)的蔗糖溶液中平衡10分钟,再用上述PBS液洗涤3次。

  ②一步冷冻法:也叫一步细管法。该要领是由慢速冷冻法改良而来,细管内的冷冻液和蔗糖液是分隔的,因此,在细管内用蔗糖液可一步脱除甘油抗冻剂,从而利于在出产中推广应用。

  ③玻璃化冷冻法:是近年来成长起来的一种新的要领。将胚胎在适当的冷冻掩护剂混合液中作短暂处理惩罚后,直接投入液氮。冷冻掩护剂在急剧降温到很低温度时能被浓缩而不结晶,而且液体的粘性增强,由液态变为透明的固态,形成玻璃化。用这种要领冷冻,无需冻前分步添加抗冻剂和冻后分步脱除抗冻剂的繁琐法式,简化了冷冻过程,是一种简便、快速、有效的冷冻要领,不需要冷冻仪器。

  以上就是的详细介绍,相信各人在此根本之上都有必然的了解,但愿对各人有所辅佐。如果您还想了解更多相关的资讯,如果您还有不懂或任何疑问,可以与在线,为您答疑解惑。

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